退火溫度確定的計算公式是：4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8） 。退火溫度（AnnealingTemperature）是指引物和模板結(jié)合時候的溫度參數(shù)，當50%的引物和互補序列表現(xiàn)為雙鏈DNA分子時的溫度 。它是影響PCR特異性的較重要因素 。在理想狀態(tài)下，退火溫度足夠低，以保證引物同目的序列有效退火，同時還要足夠高，以減少非特異性結(jié)合 。合理的退火溫度從55℃到70℃ 。退火溫度一般設(shè)定比引物的Tm低5℃ 。

【退火溫度怎么確定】

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