EcoTILLING （Ecotype Targeting Induced Local Lesions IN Genomes）可快速檢測自然群體中的SNP（Single Nucleotide Polymorphism）等DNA變異 。 第一次建立了簡化的茶樹EcoTILLING技術(shù)體系：首先篩選擴(kuò)增目的基因的特異PCR引物；然后通過CELI酶切PCR產(chǎn)物優(yōu)化實(shí)驗(yàn) ， 確定酶切時(shí)間20min、10×buffer組成為250mmol／L Tris-HCI（pH7．4）、150mmol／LKCI、15mmol／LMgSO4、4lag／mLBSA和0．04％Triton x-100 ， 反應(yīng)溫度為47．5℃ ， 酶量為1．8μL CJE（Celery Juice Extract）／10μL反應(yīng)體系時(shí) ， 酶切的譜帶信號較強(qiáng)、特異性高；初步確定合適的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測條件為凝膠濃度5％、上樣量4～5μL、有效分離長度要達(dá)到15cm 。 利用上述簡化的EcoTILLING對6份茶樹種質(zhì)870bp的PPO基因片段實(shí)現(xiàn)了分型 ， 經(jīng)測序驗(yàn)證酶切產(chǎn)生的譜帶與6份種質(zhì)內(nèi)部或不同種質(zhì)間的SNP位置吻合 。 【茶樹簡化EcoTILLING技術(shù)的建立】完成機(jī)構(gòu)：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所茶樹資源與改良研究中心／國家茶樹改良中心,浙江杭州310008

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