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微波輔助提取鐵觀音茶多糖及其抗氧化活性研究

多糖抗氧化活性微波茶葉文獻(xiàn)茶知識鐵觀音茶提取

O引言
茶作為當(dāng)今世界三大飲料之一越來越受到人們的歡迎 。 尤其是近年來，人們生活水平逐步提高，對茶飲料的保健功能越來越重視 。 研究表明，作為茶葉中活性組分之一的茶多糖（TPS），具有抗氧化、抗血栓、降血糖、增強(qiáng)機(jī)體免疫能力等多種活性 。 隨著人們對多糖生物學(xué)功能的深入認(rèn)識，從各種天然產(chǎn)物中提取的生物活性多糖的研究成為人們關(guān)注的焦點(diǎn) 。 20世紀(jì)90年代初，日本學(xué)者清水岑夫認(rèn)為茶葉中治療糖尿病的藥理成分為茶葉多糖，此后有關(guān)茶葉多糖的研究報道逐年增多 。 在茶葉加工過程中有大量的枝葉和灰末等副產(chǎn)品未被利用，因此從這些粗老茶葉和茶葉生產(chǎn)的副產(chǎn)品中提取茶多糖作為保健食品的功能因子，則可變廢為寶 。 微波輔助浸提技術(shù)是近年發(fā)展起來的一種新型物理破壁方法，與傳統(tǒng)熱水浸提方法相比，具有節(jié)能、快速、提取效率高等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛用于植物有效成分的提取，尤其是以極性溶劑為萃取劑的浸提過程，但目前尚未在茶多糖加工中使用 。 福建是一個產(chǎn)茶大省，尤其以鐵觀音茶最為出名 。 本文用微波輔助浸提鐵觀音茶多糖，采用正交實(shí)驗優(yōu)化微波浸提工藝條件，并對微波浸提和常規(guī)浸提產(chǎn)品的抗氧化活性進(jìn)行比較，為今后茶多糖高效大規(guī)模的生產(chǎn)，提高茶葉的綜合經(jīng)濟(jì)效益提供依據(jù) 。
1材料與方法
1.1實(shí)驗材料
茶葉，市售安溪鐵觀音茶葉 。
1.2試劑與儀器
三（羥甲基）胺基甲烷，生化試劑，中國醫(yī)藥集團(tuán)；鄰苯三酚、鄰二氮菲、鹽酸、過氧化氫、硫酸亞鐵、無水乙醇及其他試劑，如無特殊說明均為分析純 。 DKZ電熱恒溫振蕩水槽（上海實(shí)驗儀器廠）；723PC可見分光光度計（上海欣茂儀器有限公司）；BS／BT電子天平（德國賽多利斯股份公司）；RE52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；SHZ-IIID微波爐（上海亞榮生化儀器廠）；TDL一5離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；pH211臺式酸度測定儀（北京哈納科技有限公司） 。
1.3實(shí)驗方法
1）鐵觀音茶多糖的提取將烘干的鐵觀音茶葉粉碎過篩，經(jīng)乙醚回流脫脂，微波處理一定時間后于60℃熱水浸提兩次，每次2h，抽濾，合并濾液，減壓濃縮，加入5倍體積質(zhì)量分?jǐn)?shù)95％的乙醇沉淀，低溫靜置過夜，4000r／min離心，沉淀加蒸餾水溶解，再次重復(fù)乙醇沉淀的步驟2次，最后一次得到的沉淀用少量水溶解，活性炭脫色后，Sevag法脫蛋白質(zhì)4次，濃縮，真空干燥，得到鐵觀音茶多糖 。
2）粗多糖得率的計算多糖含量測定用苯酚一硫酸法 。 粗多糖得率的計算以1g干品中提取出來的粗多糖占原料總量的百分?jǐn)?shù)表示，計算公式為：粗多糖得率／％=（O.9×多糖質(zhì)量濃度×提取液體積／原料干重）×100，其中：0.9為葡萄糖的換算系數(shù)；多糖質(zhì)量濃度的單位為ug·mL―1；提取液體積的單位為mL；原料干重的單位為ug 。
3）茶多糖對O2―自由基的清除率0 。 05mol／LTifs-HCI緩沖溶液（pH=8.2）4 。 4mL，25oC預(yù)熱20min，加人不同濃度的茶多糖溶液0.10mL，再加入25℃預(yù)熱的2.50mmol／L鄰苯三酚0 。 50mL，混勻后于25℃恒溫反應(yīng)4min，然后用10mol／L鹽酸終止反應(yīng)，于320nm處測定吸光值 。 清除率按下式計算：O2―清除率／％=（1一（A1一A2）／A0）×100，其中：A0一不含茶多糖溶液的吸光值；A1一含有茶多糖溶液的吸光值；A2一含茶多糖但不含鄰苯三酚溶液的吸光值 。
4）茶多糖對·OH自由基的清除率取0 。 75mmol／L鄰二氮菲溶液1mL，PBS溶液2mL和蒸餾水1mL，充分混勻后，加0.75mmol／L硫酸亞鐵1mL混勻，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.01％的過氧化氫1mL，37℃下保溫60min，于536nm處測其吸光值A(chǔ)p，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)3O％的乙醇1mL代替1mL過氧化氫，測得吸光值A(chǔ)g 。 再用試樣1mL代替1mL蒸餾水，測得吸光值A(chǔ)s，根據(jù)：·OH清除率／％=（As一Ap）／（Ag一Ap）×100計算·OH清除率 。

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